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液相色谱仪HPLC法测定蛋黄中胆固醇含量
点击次数:1097 更新时间:2017-11-29

鸡蛋营养丰富,含有蛋白质、脂肪、胆固醇、卵磷脂、维生素、铁、钙、钾等人体需要的矿物质。胆固醇又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世纪人们已从胆石中发现了胆固醇,1816年化学家本歇尔将这种具脂类性质的物质命名为胆固醇。胆 固醇广泛存在于动物体内,尤以脑及神经组织中zui为丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似,不溶于水,易溶于乙mi、氯方等溶剂。胆 固醇是动物组织细胞所*的重要物质,它不仅参与形成细胞膜,而且是合成胆汁酸,维生素D以及甾体激素的原料然而有研究人员提出,鸡蛋胆固醇含量相对较高,过多摄入鸡蛋会导致人体血清胆固醇增高,引发心血管疾病。由此我们对鸡蛋中胆固醇含量进行研究,探索快速检测鸡蛋中胆固醇含量的方法。

 实验部分

1.仪器与试剂

   仪器:Waters液相色谱仪waters 2695配置高压泵,紫外检测器),万分之一梅特勒电子天平,涡旋混合仪,离心机,超声波清洗器 

   试剂: 胆固醇标准品,甲醇(色谱纯),异丙醇(分析纯),**(分析纯),石油醚(分析纯),无水乙醇(分析纯),市售普通鸡蛋

2. 色谱条件

    色谱柱:C18色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;流动相:甲醇-异丙醇(4:1v/v;流速:1.0mL/min;温度:25 进样量:20μL检测波长:205nm

3 .标准溶液配制

    准确称取胆固醇标准品25mg,于25ml容量瓶中,用无水乙醇溶解稀释至刻度,得胆固醇储备液(1.0g/L)。
    取胆固醇储备液0.00.5 1.02.04.06.08.01.0ml10ml容量瓶中,无水乙醇稀释定容,的浓度为00.05 0.10.20.40.60.81.0g/L 胆固醇标准溶液。

4 .样品前处理
  取鸡蛋称重,除去蛋清,准确称取蛋黄重量。取蛋黄样品2.0g,用20ml高纯水溶解稀释混匀,得蛋黄稀释液(0.1g/ml)。取蛋黄稀释液1.0ml于 具塞离心管中,加无水乙醇1.0ml,涡旋混匀,加乙mi3.0ml,石油醚3.0ml,涡旋混合,将混合液离心(4000r/min),使液体分层,取上 层有机相;下层再加入2.0ml**和2.0ml石油醚进行萃取,合并上层萃取液,氮吹仪吹干(温度<30℃),0.5ml乙醇溶解,经 0.45μm有机微孔滤膜过滤后,上机检测。

5.结果与讨论

6.标准工作曲线

    配制好的系列胆固醇标准溶液,在设定好的色谱条件下进行色谱分析,进样量为20μL,保留时间为6.72min,每个浓度标准溶液重复进样三次,以峰高 mAU)为纵坐标,胆固醇标准溶液浓度C(g/L)为横坐标,绘制标准工作曲线,线性回归方程为H=76.45C-0.052,相关系数r=0.9991

7.蛋黄中胆固醇含量

    将处理好的蛋黄样品取样测试,进样量20μL,在6.72min胆固醇被洗脱出来,蛋黄其他组分能与胆固醇有效分离,不干扰胆固醇的测定。由胆固醇标准曲线回归方程计算胆固醇含量。(液相图谱件见图1,结果见表1

蛋黄胆固醇液相图谱



蛋黄胆固醇含量

样品编号

鸡蛋重量g

蛋黄重量g

胆固醇含量(mg/g蛋黄)

胆固醇含量(mg/个蛋黄)

1

60.23

15.76

12.11

190.85

2

58.46

14.98

11.34

169.87

3

59.47

15.31

10.76

164.74

8.结论

    本文建立了利用反相液相色谱法快速测定蛋黄中胆固醇的方法,样品无需皂化处理,直接用乙mi和石油醚进行萃取,大大节约了样品前处理时间,操作快速简便, 具有良好的准确度和重现性,可做为测定蛋黄中胆固醇含量的有效方法。另胆固醇主要来自人体自身合成,食物中的胆固醇是次要补充。一般常人每日从食物中摄取 胆固醇200mg,即可满足身体需要。专家建议每天摄入50mg-300mg胆固醇为佳。